เทคนิคและวิธีการศึกษากลไกการทำงานของเอนไซม์ |
Stopped-flow
spectrophotometer
เป็นเครื่องมือที่ใช้ศึกษาอัตราการเกิดปฏิกิริยาที่มีความว่องไวสูง
(fast reaction) โดยใช้เทคนิคระบบการผสมและหยุดปฏิกิริยาอย่างรวดเร็ว
(stopped-flow system) โดยสามารถวัดสัญญานการเปลี่ยนแปลงด้วยวิธีสเปกโตรสโคปีและใช้โปรแกรมคอมพิวเตอร์ในการวิเคราะห์ข้อมูล
ซึ่งวิธีนี้สามารถศึกษาปฏิกิริยาตั้งแต่
0.001 วินาที
สารที่อยู่ในไซริงค์
A และ B จะถูกฉีดเข้าผสมกันเข้าไปที่เซลล์ตรวจวัด
แล้วผ่านไปที่ท่อที่ดันลูกสูบจนก้านลูกสูบชนผนังด้านหลังซึ่งส่งสัญญานทำให้ระบบหยุดลง
พร้อมกับส่งสัญญานทำให้ระบบตรวจวัดด้วยวิธีสเปกโตรสโคปีทำงาน
แล้วประมวลผลด้วยระบบคอมพิวเตอร์
Rapid
Quench Flow (QF)
QF เป็นเครื่องมือที่ใช้ศึกษาอัตราการเกิดปฏิกิริยาที่มีความเร็วสูง
(rapid reaction) ที่ไม่สามารถตรวจวัดด้วยวิธีทางสเปกโตรสโคปีได้ในทันที
โดยสารที่อยู่ในไซริงค์ A และ B จะถูกผลักเข้าไปผสมกันที่
delay loop ตามระยะเวลาที่ตั้งไว้ (age
time) ซึ่งเทคนิคนี้สามารถหยุดปฏิกิริยาได้ตั้งแต่
0.004-100 วินาที จากนั้นสารผสมทั้งสองจะถูกผลักด้วยบัฟเฟอร์ที่ไซริงค์
C ไปผสมกับสารเคมีที่ใช้หยุดปฏิกิริยา
ซึ่งอาจเป็นสารประเภทกรดหรือเบสหรือตัวทำละลายอินทรีย์
(quenching agent; อยู่ในไซริงค์ D)
สารตัวอย่าง (quenched sample) ที่ได้จากเวลาต่างๆ
กันจะถูกนำไปวิเคราะห์หาสารตัวกลาง
(intermediate) หรือสารผลิตภัณฑ์ (product)
โดยใช้เทคนิคต่างๆ ตามความเหมาะสม
|